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　　人免疫抑制酸性蛋白(IAP)ELISA試劑盒實驗使用說明書 本生一直視質量控制為企業的生命，追求企業競爭力的不斷提升。公司在經營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業精神作為標準，以過硬的質量和優良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發展目標，本生，您信任的合作伙伴！本生試劑盒

　　人免疫抑制酸性蛋白 ( IAP )ELISA 試劑盒

　　( 用于血清、血漿、細胞培養上清液和其它生物體液內 )

　　原理

　　本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA 法。用抗人 IAP 單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的 IAP與單抗結合，加入生物素化的抗人 IAP ，形成免疫復合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的 Streptavidin 與生物素結合，加入底物工作液顯藍色，最后加終止液硫酸，在 450nm 處測 OD 值，IAP 濃度與 OD 值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中IAP 濃度。

　　試劑盒組成 ( 2-8 ℃保存)

　　酶標 板 (Coated Wells )96 孔酶標抗體工作液(Enzyme Conjugate )12ml

　　10 ×標本稀釋液(Sample Buffer )12ml20×濃縮洗滌液( Wash Buffer )50ml

　　標準品 (Standards ) ： 8ng/瓶2 瓶底物工作液(TMB Solution )12ml

　　第一抗體工作液( Biotinylated Antibody )12ml終止液 (Stop Solution )12ml

　　準備試劑與收集血樣

　　1. 收集標本：血清、血漿(EDTA )、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存，避免反復凍融。

　　2. 標準品液配制：使用前加入1ml 蒸餾水 混勻，配成 8000p g/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管， 每 管加入標本稀釋液 20 0ul 。在第一管中加入 8000p g/ml 的標準品溶液 2 00ul 混勻后用加樣器吸出 2 00ul ，移至第二 管 。如此反復作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 2 00ul 棄去。第八 管 為空白對照。

　　3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。

　　4. 洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋(示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)

　　檢測程序

　　1. 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

　　2. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

　　3. 每孔中加入第一抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

　　4. 洗板：同前。

　　5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

　　6. 洗板：同前。

　　7. 每孔加入底物工作液100ul ，置 37 ℃ 暗處反應15 分鐘。

　　8. 每孔加入100ul 終止液混勻。

　　9. 30分鐘內用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

　　結果計算與判斷

　　1. 所有 OD 值都應減除空白值后再行計算。

　　2. 以標準品40 00 、20 00 、100 0 、500 、 250 、 125 、 62.5 、 0 pg /ml 為橫坐標， OD 值為縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。

　　3. 根據樣品 OD 值在該曲線圖上查出相應 IAP 含量。

　　試劑盒性能

　　1. 靈敏度 ： 最小的IAP 檢測濃度小于 3 0pg/ml。

　　2. 特異性： 可同時檢測重組或天然的人 IAP 。 不與 人其它細胞因子有交叉反應。

　　3. 重復性：板內、板見變異系數均小于10%。

　　注意事項

　　1. 以上標準孔及待 測 樣品均建議做復孔，每次測定應同時 做 標準曲線。

　　2. 洗滌過程 很關鍵。洗滌不充分將導致精確度誤差及 OD 值錯誤地升高。

　　3. 板條開封后剩余板條要再封好，保持 板條干燥 。

　　4. 本試劑盒宜置 4 o C冰箱保存。

　　5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷!